Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dlx-3 (h): sc-405063

Présentation

DLX3 code le facteur de transcription à homéoboîte Dlx-3, un régulateur se liant à l’ADN essentiel aux programmes de lignage dérivés de l’ectoderme et de la crête neurale, notamment la différenciation épidermique, la morphogenèse du follicule pileux, l’odontogenèse et le développement cranio-facial. Dlx-3 module des réseaux transcriptionnels qui coordonnent la spécification du destin cellulaire, la mise en place des patrons tissulaires et la différenciation terminale, en interagissant avec des axes de signalisation du développement plus larges, tels que les circuits de régulation génique dépendants de BMP et de Wnt. En biologie humaine, une altération de la fonction de DLX3 est associée à des anomalies des annexes ectodermiques et des structures cranio-faciales, ce qui reflète son rôle dans les interactions épithélio-mésenchymateuses. En tant que régulateur transcriptionnel, Dlx-3 constitue un nœud exploitable pour étudier l’engagement de lignée, la formation de la barrière et les programmes transcriptionnels associés à la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dlx-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DLX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DLX3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DLX3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dlx-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DLX3 pour l'étude de la signalisation de Dlx-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DLX3 essentiels à la fonction de Dlx-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DLX3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dlx-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dlx-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DLX3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dlx-3 plasmide HDR (h) et le Dlx-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DLX3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DLX3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.