Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dlx-1 (m): sc-420012

Présentation

Dlx1 code le facteur de transcription à homéoboîte Dlx-1, un régulateur se liant à l’ADN qui coordonne les programmes d’expression génique nécessaires à la mise en place des structures embryonnaires et au neurodéveloppement. Chez la souris, Dlx-1 joue un rôle majeur dans le développement du prosencéphale, notamment dans la spécification, la migration et la différenciation des lignées d’interneurones GABAergiques, et il contribue à la morphogenèse craniofaciale et des arcs branchiaux. Par le contrôle transcriptionnel de réseaux développementaux en aval, Dlx-1 influence les décisions de destinée cellulaire, la structuration des tissus et la maturation des circuits neuronaux. Dans la littérature, des programmes géniques associés à DLX1 dérégulés ont été reliés à des trajectoires neurodéveloppementales altérées et à des phénotypes oncogéniques dans certains contextes cellulaires, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la différenciation et des états transcriptionnels associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dlx-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Dlx1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Dlx1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Dlx1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dlx-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Dlx1 pour l'étude de la signalisation de Dlx-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Dlx1 essentiels à la fonction de Dlx-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Dlx1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dlx-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Dlx-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Dlx1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dlx-1 plasmide HDR (m) et le Dlx-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Dlx1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Dlx1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.