DLST Double Nickase Plasmid (h): sc-409604-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DLST Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DLST Double-Nickase-Plasmid (h) und DLST Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DLST abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DLST Double Nickase Plasmid (h) | sc-409604-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DLST Double Nickase Plasmid (h2) | sc-409604-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DLST kodiert die Dihydrolipoamid‑S‑Succinyltransferase (E2) des mitochondrialen 2‑Oxoglutarat‑Dehydrogenase‑Komplexes, eines Schlüsselenzyms des Tricarbonsäure‑ (TCA‑) Zyklus, das 2‑Oxoglutarat in Succinyl‑CoA umwandelt. Durch die Katalyse der Übertragung der Succinylgruppe auf CoA und die Koordination des lipoylabhängigen Substrat‑Channelings unterstützt DLST den oxidativen Stoffwechsel, die NADH‑Produktion und die mitochondriale Redoxhomöostase. Die DLST‑Aktivität ist mit Anaplerose/Kataplerose verknüpft und reguliert die Verfügbarkeit von TCA‑Intermediaten, die für die Biosynthese genutzt werden, einschließlich Succinyl‑CoA für die Hämsynthese und die Proteinsuccinylierung. Eine veränderte DLST‑Funktion wurde mit mitochondrialer Stoffwechselstörung in Verbindung gebracht und in Kontexten impliciert, in denen mitochondriale Atmung, Reaktionen auf oxidativen Stress und proliferativer Stoffwechsel gestört sind.
DLST Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DLST-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DLST abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DLST-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DLST-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.