DIO3 Double Nickase Plasmid (m): sc-430733-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DIO3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DIO3 Double-Nickase-Plasmid (m) und DIO3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dio3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DIO3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-430733-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Dio3 kodiert die Typ‑3‑Iodthyronin‑Deiodinase (DIO3), ein selenhaltiges Enzym, das mit dem endoplasmatischen Retikulum und der Plasmamembran assoziiert ist und Schilddrüsenhormone inaktiviert, indem es T4 zu reversen T3 und T3 zu T2 umwandelt und so die lokale Schilddrüsenhormon‑Signalübertragung begrenzt. Durch die Steuerung der intrazellulären T3‑Verfügbarkeit beeinflusst DIO3 transkriptionsabhängige Programme des Schilddrüsenhormonrezeptors, die Proliferation, Differenzierung, Stoffwechsel und den zeitlichen Ablauf der Entwicklung regulieren. Dio3 ist ein imprintetes Gen innerhalb des Dlk1–Dio3‑Lokus und spielt eine zentrale Rolle bei der Musterbildung fetaler Gewebe sowie bei neurodevelopmentalen Prozessen, in denen eine strenge Kontrolle der Schilddrüsenhormonwirkung erforderlich ist. Eine Fehlregulation der DIO3‑Aktivität oder des Imprintings an diesem Lokus wurde mit veränderter endokriner Homöostase in Verbindung gebracht und in Zusammenhängen wie Entwicklungsstörungen und Tumorbiologie untersucht, in denen die Schilddrüsenhormon‑Signalgebung den Zellzustand beeinflusst.
DIO3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dio3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dio3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dio3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dio3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.