DIO2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402262-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DIO2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DIO2 Double-Nickase-Plasmid (h) und DIO2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DIO2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DIO2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402262-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DIO2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402262-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane DIO2-Gen kodiert die Typ-II-Iodthyronin-Deiodinase (DIO2), ein Selenoenzym, das die Deiodierung am äußeren Ring von Thyroxin (T4) katalysiert und dadurch das aktive Schilddrüsenhormon Triiodthyronin (T3) erzeugt. Indem DIO2 die lokale intrazelluläre Verfügbarkeit von T3 steuert, prägt es rezeptorabhängige Transkriptionsprogramme der Schilddrüsenhormone, die den Energiestoffwechsel, die Thermogenese und die Differenzierung in gewebs- und kontextspezifischer Weise beeinflussen. Die DIO2-Aktivität ist in Signalwege eingebunden, die die mitochondriale Funktion, den oxidativen Stoffwechsel und adaptive Antworten auf Umweltreize steuern, einschließlich Nährstoff- und Temperatursignalen. Eine veränderte DIO2-Expression oder -Aktivität wurde mit metabolischen Phänotypen und Störungen der Schilddrüsenhormonregulation in Verbindung gebracht, was ihre Relevanz für mechanistische Studien in der endokrinen und metabolischen Forschung unterstreicht.
DIO2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DIO2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DIO2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DIO2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DIO2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.