DIO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402262

Übersicht

DIO2 kodiert die Typ‑II‑Iodthyronin‑Deiodinase, ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Selenoenzym, das die äußere Ringdeiodierung von Thyroxin (T4) zum aktiven Hormon Trijodthyronin (T3) katalysiert. Durch die Kontrolle der intrazellulären T3‑Verfügbarkeit prägt DIO2 schilddrüsenhormonrezeptor‑abhängige Transkriptionsprogramme, die je nach Gewebe den Energiestoffwechsel, die Thermogenese, die Lipid‑ und Glukosehomöostase sowie Differenzierungsprozesse regulieren. Die DIO2‑Aktivität ist in Redox‑ und Selenbiologie eingebettet, einschließlich der Selenoproteinsynthese und oxidativer Stressantworten, die Stabilität und Umsatz des Enzyms beeinflussen. Eine veränderte DIO2‑Expression oder ‑Funktion wurde mit metabolischen Phänotypen und schilddrüsenhormon‑responsiver Pathophysiologie in Verbindung gebracht, was ihre Untersuchung in der endokrinen Regulation, bei adipositasbezogenen Mechanismen und in der gewebespezifischen Schilddrüsenhormonsignalgebung unterstützt.

Das DIO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DIO2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DIO2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DIO2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DIO2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DIO2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DIO2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DIO2-Exone abzielen, die für die DIO2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DIO2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DIO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DIO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DIO2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DIO2 HDR-Plasmid (h) und DIO2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DIO2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DIO2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.