DIC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417651

Übersicht

SLC25A10 kodiert den mitochondrialen Dicarboxylat-Carrier (DIC), einen Transporter der inneren Membran, der Malat und Succinat gegen anorganisches Phosphat austauscht und damit den mitochondrialen Metabolitenfluss mit dem zytosolischen Bedarf an Biosynthese- und Redoxäquivalenten verknüpft. Durch die Regulierung der Verfügbarkeit von Dicarboxylaten beeinflusst DIC die Anaplerose, das Gleichgewicht gluconeogener und lipogener Vorstufen sowie die Abstimmung des Citratzyklus mit der oxidativen Phosphorylierung. Eine veränderte SLC25A10-Aktivität wurde mit metabolischer Reprogrammierung und mitochondrialen Stressantworten in Verbindung gebracht, was sie für die Untersuchung von Signalwegen relevant macht, die Nährstoffverwertung mit mitochondrialer Funktion koppeln. Als Mitglied der mitochondrialen Carrier-Familie bietet DIC zudem einen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie Transportbegrenzungen den Umgang mit ROS und den proliferativen Stoffwechsel in krankheitsrelevanten Zellmodellen prägen.

Das DIC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC25A10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC25A10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC25A10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DIC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC25A10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DIC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC25A10-Exone abzielen, die für die DIC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC25A10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DIC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DIC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC25A10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DIC HDR-Plasmid (h) und DIC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC25A10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC25A10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.