Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Dia 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403238
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Dia 2 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Dia 2, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Dia 2 Antibody (H-3): sc-393489
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Dia 2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403238 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DIAPH2 (Dia 2) codifica una formina correlata alle strutture diafane che regola la nucleazione e l’allungamento dei filamenti di actina a valle della segnalazione mediata dalle GTPasi della famiglia Rho. Attraverso il suo ruolo nel rimodellamento del citoscheletro, DIAPH2 contribuisce al controllo della forma cellulare, alla dinamica dell’adesione e alla migrazione direzionale, processi strettamente legati alla citocinesi e al mantenimento della polarità cellulare. Alterazioni nell’organizzazione dell’actina dipendente dalle formine possono perturbare il posizionamento del fuso mitotico e la stabilità del genoma, collegando le vie associate a DIAPH2 a fenotipi proliferativi e dello sviluppo. DIAPH2 è stata inoltre studiata in contesti in cui una regolazione citoscheletrica compromessa è rilevante per la biologia riproduttiva e per il comportamento cellulare oncogenico.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Dia 2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DIAPH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DIAPH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DIAPH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Dia 2.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DIAPH2 per lo studio della segnalazione di Dia 2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DIAPH2 critici per la funzione di Dia 2
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DIAPH2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Dia 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Dia 2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DIAPH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Dia 2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Dia 2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DIAPH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DIAPH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.