Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dia 1 (h): sc-401929
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Dia 1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Dia 1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Dia 1 Antibody (E-4): sc-373807
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dia 1 (h) | sc-401929 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
DIAPH1 (Dia1) code une formine sensible à RhoA qui initie et allonge des filaments d’actine linéaires, en coordonnant le remodelage du cytosquelette nécessaire à la forme cellulaire, à l’adhésion et à la migration dirigée. Dia1 s’interface avec la signalisation des GTPases Rho et coopère avec la profiline et d’autres régulateurs de l’actine pour soutenir l’assemblage des fibres de stress, la formation de filopodes et la cytokinèse. Par ses effets sur le dialogue actine–microtubules et sur le trafic membranaire, DIAPH1 contribue à des processus tels que le positionnement du fuseau et la dynamique vésiculaire. Une activité dérégulée de DIAPH1 a été associée à une mécanotransduction altérée et présente une pertinence pathologique dans la surdité héréditaire ainsi que dans des phénotypes plaquettaires/cytosquelettiques, ce qui en fait une cible utile pour des études fonctionnelles dans des systèmes cellulaires humains.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dia 1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DIAPH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DIAPH1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DIAPH1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dia 1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DIAPH1 pour l'étude de la signalisation de Dia 1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de DIAPH1 essentiels à la fonction de Dia 1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DIAPH1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Dia 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dia 1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DIAPH1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Dia 1 plasmide HDR (h) et le Dia 1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DIAPH1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DIAPH1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.