DHS Double Nickase Plasmid (h): sc-402858-NIC

Das humane DHPS-Gen kodiert die Deoxyhypusin-Synthase (DHS), ein essenzielles, NAD-abhängiges Enzym, das den ersten Schritt der Hypusinierung katalysiert, indem es eine Aminobutylgruppe von Spermidin auf eIF5A überträgt und dabei Deoxyhypusin erzeugt. Diese posttranslationale Modifikation ist für die Aktivität von eIF5A erforderlich und unterstützt die Translationselongation, die Kontrolle der Proteinsynthese sowie die Zellzyklusprogression; damit verknüpft sie den Polyaminstoffwechsel mit der Proteostase. Die Funktion von DHS überschneidet sich mit Signalwegen, die zelluläres Wachstum und Stressantworten steuern, und Störungen der DHPS–eIF5A-Hypusinierungsachse wurden mit dysregulierter Proliferation und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht. Da die Hypusinierung die selektive Translation schwer zu synthetisierender Motive beeinflusst, wird DHPS häufig im Kontext metabolischer Umprogrammierung, proteotoxischen Stresses und von Mechanismen untersucht, die die Gewebehomöostase aufrechterhalten.

DHS Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DHPS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DHPS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DHPS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DHPS-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.