DHRS4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-411534-ACT

DHRS4 kodiert Dehydrogenase/Reduktase 4, ein zytosolisches Mitglied der Familie der Short-Chain-Dehydrogenasen/-Reduktasen (SDR), das NAD(P)(H)-abhängige Redoxreaktionen an endogenen Carbonylsubstraten katalysiert. Durch die Regulierung der wechselseitigen Umwandlung von Aldehyden und Ketonen in die entsprechenden Alkohole trägt DHRS4 zur zellulären Entgiftungskapazität und zur Redox-Homöostase bei – Prozesse, die mit oxidativen Stressantworten und metabolischer Anpassung verknüpft sind. Die DHRS4-Aktivität wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die den retinoidbezogenen Stoffwechsel sowie allgemein den Umgang mit Lipiden und Xenobiotika steuern, was Differenzierung und Stress-Signalgebung beeinflusst. Veränderte DHRS4-Expression wurde in Datensätzen zu Krebs und Stoffwechsel beobachtet, was seine Nutzung als funktionellen Knotenpunkt zur Untersuchung redoxkontrollierter Phänotypen unterstützt, ohne klinische Aussagen zu implizieren.

DHRS4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DHRS4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

DHRS4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DHRS4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DHRS4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DHRS4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DHRS4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DHRS4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DHRS4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DHRS4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.