Plasmide CRISPR d'Activation (h) DHRS4: sc-411534-ACT

DHRS4 code la déshydrogénase/réductase 4, un membre cytosolique de la famille des déshydrogénases/réductases à chaîne courte (SDR) qui catalyse des réactions d’oxydo‑réduction dépendantes du NAD(P)(H) sur des substrats carbonylés endogènes. En régulant l’interconversion des aldéhydes et des cétones en leurs alcools correspondants, DHRS4 contribue à la capacité de détoxification cellulaire et à l’homéostasie rédox, des processus qui recoupent les réponses au stress oxydant et l’adaptation métabolique. L’activité de DHRS4 a été associée à des voies impliquées dans le métabolisme des rétinoïdes ainsi que, plus largement, dans la gestion des lipides et des xénobiotiques, ce qui influence la différenciation et la signalisation liée au stress. Une expression altérée de DHRS4 a été observée dans des jeux de données associés au cancer et au métabolisme, ce qui en fait un nœud fonctionnel pertinent pour étudier des phénotypes contrôlés par le rédox, sans préjuger de conséquences cliniques.

DHRS4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DHRS4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DHRS4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DHRS4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DHRS4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DHRS4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DHRS4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DHRS4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DHRS4 dans les cellules tumorales présentant une expression de DHRS4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.