DHRS2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404988-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DHRS2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DHRS2 Double-Nickase-Plasmid (h) und DHRS2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DHRS2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DHRS2: sc-517054
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DHRS2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404988-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DHRS2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404988-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes DHRS2 (Dehydrogenase/Reduktase 2) kodiert eine NADPH-abhängige Oxidoreduktase aus der Superfamilie der kurzkettigen Dehydrogenasen/Reduktasen, die die zelluläre Redox-Homöostase und den Stoffwechsel unterstützt. DHRS2 wird mit der Regulation von Stressantworten und der Kontrolle des Zellzyklus in Verbindung gebracht, einschließlich berichteter Interaktionen mit p53-assoziierten Signalwegen sowie Pfaden, die Proliferation und Seneszenz beeinflussen. Durch die Modulation des intrazellulären Redoxgleichgewichts kann DHRS2 den Umgang mit oxidativem Stress und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme beeinflussen, die für die Genomstabilität relevant sind. Eine veränderte DHRS2-Expression wurde in mehreren Krankheitskontexten beobachtet, was DHRS2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur metabolischen Umprogrammierung und stressadaptiven Signalübertragung in menschlichen Zellen macht.
DHRS2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DHRS2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DHRS2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DHRS2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DHRS2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.