Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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DHODH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402983
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- DHODH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico DHODH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DHODH Anticuerpo (E-8): sc-166348
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
DHODH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402983 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
La DHODH (dihidroorotato deshidrogenasa) humana es una flavoproteína de la membrana interna mitocondrial que cataliza la oxidación limitante de la velocidad del dihidroorotato a orotato en la biosíntesis *de novo* de pirimidinas, acoplando la producción de nucleótidos a la cadena respiratoria a través de la ubiquinona. Al controlar la disponibilidad de UMP, la DHODH sostiene la síntesis de ADN/ARN, la progresión del ciclo celular y la adaptación metabólica durante el estrés proliferativo. La alteración de la actividad de DHODH remodela los reservorios de nucleótidos, la dinámica de replicación y el equilibrio redox mitocondrial, vinculándola con vías que gobiernan el mantenimiento del genoma y la bioenergética celular. Se han observado un metabolismo de pirimidinas desregulado y una dependencia de DHODH en múltiples contextos relevantes para enfermedades, incluida la proliferación de células cancerosas y la activación de células inmunitarias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO DHODH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DHODH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DHODH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DHODH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DHODH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DHODH para la investigación de la señalización de DHODH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de DHODH críticos para la función de DHODH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DHODH para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido DHODH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DHODH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DHODH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DHODH (h) y el plásmido HDR DHODH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DHODH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DHODH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.