Plasmide Double Nickase (h) DHCR24: sc-405507-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DHCR24 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DHCR24 Double Nickase (h) et le plasmide DHCR24 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DHCR24. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: DHCR24 Antibody (A-4): sc-398938
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DHCR24 | sc-405507-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DHCR24 | sc-405507-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DHCR24 code la 24‑déhydrocholestérol réductase, une enzyme du réticulum endoplasmique qui catalyse l’étape terminale de la biosynthèse du cholestérol en réduisant le desmostérol en cholestérol. Par son rôle dans la voie de Bloch, DHCR24 influence la composition en stérols des membranes, l’organisation des radeaux lipidiques et des réseaux de signalisation sensibles aux stérols, qui s’entrecroisent avec l’homéostasie du RE et les réponses au stress oxydatif. Une perturbation de l’activité de DHCR24 peut déplacer l’équilibre desmostérol/cholestérol, avec des effets sur la différenciation cellulaire et l’adaptation métabolique dans des contextes dépendants des stérols. Des altérations de l’expression ou de la fonction de DHCR24 ont été rapportées dans des troubles du métabolisme du cholestérol et ont été étudiées dans des modèles de neurodégénérescence et d’oncologie pour leurs liens avec la résistance au stress et le remodelage lipidique.
DHCR24 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DHCR24 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DHCR24. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DHCR24. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DHCR24.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.