dHAND CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402017-ACT

HAND2 (dHAND) kodiert einen Transkriptionsfaktor der basic-Helix-Loop-Helix-(bHLH)-Familie, der die Spezifizierung mesenchymaler Zelllinien und die Organmorphogenese steuert, mit wichtigen Funktionen in der Herzentwicklung, in Derivaten der Neuralleiste und in der Musterbildung der Gliedmaßen. dHAND integriert entwicklungsbiologische Signalnetzwerke einschließlich BMP, WNT/β-Catenin, NOTCH und SHH, um Genprogramme zu regulieren, die Proliferation, Migration und Differenzierung kontrollieren. In der Humanbiologie werden veränderte HAND2-Expression oder Störungen der Regulation mit angeborenen Herzfehlern und weiteren Entwicklungsanomalien in Verbindung gebracht; zudem wird eine fehlregulierte transkriptionelle Kontrolle in Zusammenhängen wie kardialem Remodeling und Tumorbiologie untersucht. Diese Eigenschaften machen HAND2 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um transkriptionelle Schaltkreise und Schicksalsentscheidungen in relevanten Zell- und Organoidmodellen zu analysieren.

dHAND Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HAND2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

dHAND Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HAND2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HAND2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen dHAND-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HAND2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von dHAND-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des dHAND-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HAND2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.