Plasmide CRISPR d'Activation (h) DGK-ζ: sc-403843-ACT

La diacylglycérol kinase zêta (DGKζ), codée par le gène humain **DGKZ**, phosphoryle le diacylglycérol (DAG) pour générer de l’acide phosphatidique, modulant ainsi l’amplitude et la durée de la signalisation dépendante du DAG. En ajustant l’équilibre des seconds messagers, DGKζ influence des voies liées à la PKC et à Ras/ERK, la signalisation proximale aux récepteurs, ainsi que des programmes de remodelage du cytosquelette qui affectent l’activation, la migration et la prolifération cellulaires. L’activité de DGKζ est également associée au métabolisme des phosphoinositides et à l’intégration des signaux en aval des récepteurs immunitaires et des signaux induits par les facteurs de croissance. Une dérégulation de la signalisation DAG–acide phosphatidique impliquant DGKζ a été mise en évidence dans des études portant sur la dysfonction immunitaire, l’inflammation et des contextes de signalisation oncogénique, ce qui soutient sa pertinence en tant que nœud mécanistique dans la recherche sur la signalisation cellulaire.

DGK-ζ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DGKZ sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DGK-ζ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DGKZ dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DGKZ, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DGK-ζ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DGKZ natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DGK-ζ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DGK-ζ dans les cellules tumorales présentant une expression de DGKZ silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.