Plasmide CRISPR d'Activation (h) Desmin: sc-400248-ACT

Le gène humain **DES** code la desmine, une protéine de filament intermédiaire de type III qui constitue un réseau structural central dans les cellules musculaires squelettiques, cardiaques et lisses. Les filaments de desmine relient les myofibrilles au sarcolemme, aux mitochondries et au noyau afin d’assurer la stabilité mécanique, la transmission des forces et le positionnement des organites lors de la contraction et des réponses au stress. Cette architecture cytosquelettique s’articule avec l’organisation des sarcomères, la mécanotransduction et les voies de protéostase qui maintiennent l’intégrité musculaire. Une expression dérégulée de **DES** ou une anomalie de l’assemblage des filaments est associée à des myopathies myofibrillaires et à des cardiomyopathies, faisant de la desmine une cible majeure pour l’étude de la dégénérescence musculaire et du remodelage cellulaire induit par le stress.

Desmin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DES sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Desmin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DES dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DES, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Desmin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DES natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Desmin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Desmin dans les cellules tumorales présentant une expression de DES silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.