Plasmide CRISPR d'Activation (h) densin-180: sc-403589-ACT

LRRC7 code la densine-180, une protéine d’échafaudage de la densité postsynaptique, enrichie aux synapses excitatrices, où elle contribue à organiser des complexes protéiques régulant l’architecture des épines dendritiques et la signalisation synaptique. La densine-180 s’associe à des composants membranaires et du cytosquelette et intègre des voies de signalisation liées à la plasticité synaptique, notamment via des interactions qui couplent la machinerie associée aux récepteurs à des kinases en aval et au remodelage de l’actine. En raison de son rôle dans le maintien de l’organisation postsynaptique et de la connectivité neuronale, LRRC7 est étudié dans le contexte de mécanismes de maladies neurodéveloppementales et neuropsychiatriques, où la structure et la signalisation des synapses sont altérées. La modulation expérimentale de l’expression de LRRC7 soutient des analyses mécanistiques de la maturation synaptique, de la signalisation dépendante de l’activité et du fonctionnement des réseaux dans des modèles neuronaux humains.

densin-180 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de LRRC7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

densin-180 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus LRRC7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription LRRC7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de densin-180. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus LRRC7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de densin-180 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie densin-180 dans les cellules tumorales présentant une expression de LRRC7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.