Plasmide CRISPR d'Activation (h) Delta: sc-400790-ACT

Le gène humain **DLL1** code le ligand canonique de Notch **Delta-like 1** (Delta), un ligand ancré à la membrane qui se lie aux récepteurs **NOTCH** pour déclencher leur clivage protéolytique et la libération du domaine intracellulaire de Notch, régulant ainsi des programmes transcriptionnels qui gouvernent les décisions de destinée cellulaire. La signalisation Notch médiée par **DLL1** est essentielle à la mise en place des patrons embryonnaires, à la neurogenèse, à la somitogenèse et au maintien des compartiments de cellules souches et progénitrices, via la modulation de la différenciation, de la prolifération et de l’inhibition latérale. Une activité altérée de l’axe **DLL1/Notch** a été associée à une dérégulation de l’homéostasie tissulaire et à des troubles du développement, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes de signalisation aberrante en cancérologie, en angiogenèse et dans la différenciation des cellules immunitaires. En tant que nœud de voie situé à la surface cellulaire, **DLL1** constitue un levier expérimental accessible pour disséquer la dynamique de la signalisation juxtacrine et les réponses transcriptionnelles en aval.

Delta Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DLL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Delta Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DLL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DLL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Delta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DLL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Delta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Delta dans les cellules tumorales présentant une expression de DLL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.