Plásmido CRISPR de Activación (m) Delta-3: sc-420011-ACT

El gen Dll3 de ratón codifica Delta-3, un ligando atípico de la familia Notch que modula principalmente la señalización del receptor Notch durante el desarrollo embrionario y el patrón tisular. Delta-3 está enriquecida en el mesodermo presomítico, donde contribuye al reloj de segmentación y a la formación de los límites de los somitas mediante la regulación de la dinámica de la vía Notch y la inhibición lateral. Al moldear las decisiones de destino celular y los programas de diferenciación, Dll3 influye en linajes neurogénicos y miogénicos y en procesos morfogenéticos más amplios. La señalización de Notch asociada a DLL3, cuando está desregulada, se ha vinculado a anomalías del desarrollo y se utiliza con frecuencia como marcador de investigación en biología de tumores neuroendocrinos, lo que respalda estudios mecanísticos del control de la vía.

Delta-3 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Dll3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Delta-3 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Dll3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Dll3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Delta-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Dll3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Delta-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Delta-3 en células tumorales con expresión de Dll3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.