DEC1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402058-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DEC1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DEC1 Double-Nickase-Plasmid (h) und DEC1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BHLHE40 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DEC1: sc-101023
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DEC1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402058-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DEC1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402058-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BHLHE40 kodiert den basischen Helix-Loop-Helix-Transkriptionsfaktor DEC1 (auch bekannt als BHLHE40/STRA13), einen kontextabhängigen Regulator der Genexpression, der hypoxische und zirkadiane Signale integriert. DEC1 ist an Transkriptionsprogrammen beteiligt, die nachgeschaltet an die Sauerstoffsensorik und zellulären Stress ablaufen, und beeinflusst über Interaktionen mit zentralen Komponenten der inneren Uhr sowie hypoxie-reaktiven Netzwerken die Zellzyklusprogression, Differenzierung und metabolische Anpassung. Durch die Modulation von Zielgenen, die an Proliferation, Apoptose und inflammatorischer Signalübertragung beteiligt sind, wird BHLHE40 mit veränderter Tumorbiologie, Immunzellfunktion und Reaktionen auf mikroumgebungsbedingten Stress in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen DEC1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der transkriptionellen Kontrolle im Zusammenspiel von Hypoxie und Zirkadianrhythmik sowie in stressadaptiven Signalwegen in menschlichen Zellen.
DEC1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BHLHE40-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BHLHE40 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BHLHE40-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BHLHE40-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.