Plásmido Doble Nickase (h) DEC-205: sc-417220-NIC

LY75 codifica DEC-205 (CD205), un receptor endocítico de lectina tipo C altamente expresado por subpoblaciones de células dendríticas, que captura antígenos glicosilados y los dirige a compartimentos endosómicos y lisosómicos para su procesamiento. Mediante captación mediada por clatrina y tráfico vesicular, DEC-205 favorece la presentación por MHC de clase II y puede influir en vías de presentación cruzada que moldean el cebado de la inmunidad adaptativa. La activación de DEC-205 se cruza con programas impulsados por reconocimiento de patrones y por citocinas que regulan la maduración de las células dendríticas, la tolerancia y la polarización de los linfocitos T. La desregulación del manejo de antígenos y de la función de las células dendríticas que involucra a LY75 es relevante para estudios de autoinmunidad, inflamación crónica, biología de infecciones y microambientes inmunes tumorales.

DEC-205 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LY75 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LY75. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LY75. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LY75 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.