Plasmide CRISPR/Cas9 KO DEC-205 (h): sc-417220

Présentation

LY75 code pour DEC-205 (CD205), un récepteur endocytaire multilectine de la famille des récepteurs du mannose, fortement exprimé par les cellules dendritiques et d’autres cellules présentatrices d’antigène. DEC-205 favorise la capture à haute efficacité et l’adressage des antigènes protéiques vers les compartiments endosomaux/lysosomaux, ce qui soutient la présentation par le CMH de classe II et, dans certaines conditions, la présentation croisée permettant l’amorçage des lymphocytes T CD8+. Par son rôle dans la capture et le traitement de l’antigène, ainsi que dans la tolérance immunitaire versus l’activation, LY75 est fréquemment utilisé pour étudier les programmes de maturation des cellules dendritiques et la polarisation de l’immunité adaptative. Des altérations de l’expression et du trafic de DEC-205 ont été associées à des contextes inflammatoires et auto-immuns, et sont également étudiées en immunologie des tumeurs en tant que marqueurs et médiateurs fonctionnels des états de présentation antigénique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DEC-205 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène LY75 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du LY75, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert LY75 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DEC-205.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en LY75 pour l'étude de la signalisation de DEC-205, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de LY75 essentiels à la fonction de DEC-205
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de LY75 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DEC-205 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DEC-205 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus LY75. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DEC-205 plasmide HDR (h) et le DEC-205 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie LY75 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles LY75 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.