DDX60 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-408255-LAC

DDX60 codifica uma helicase de RNA da família DExD/H-box induzível por interferon, que atua como sensor citosólico e amplificador da imunidade inata antiviral. Ela participa das vias de sinalização de receptores do tipo RIG-I e das vias de interferon tipo I ao promover o reconhecimento e o processamento de RNA viral e ao potencializar programas transcricionais a jusante que restringem a replicação. Por meio de suas atividades de ligação a RNA e de helicase, o DDX60 influencia o metabolismo de RNA e a magnitude da expressão de ISGs durante estresse celular e infecção. A expressão desregulada de DDX60 tem sido associada a respostas antivirais alteradas e a sinalização inflamatória, tornando-o relevante para estudos de interações hospedeiro–patógeno e mecanismos de doenças associadas ao sistema imune.

As Partículas de Ativação Lentivirais DDX60 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de DDX60 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais DDX60 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição DDX60, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de DDX60. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo DDX60 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.