DDX46 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407298

Descripción general

DDX46 codifica una helicasa de ARN dependiente de ATP que actúa como componente central del snRNP U5 dentro del espliceosoma, contribuyendo al empalme del pre-ARNm y a la fidelidad en la selección de los sitios de empalme. Al remodelar complejos ARN–proteína durante el ensamblaje del espliceosoma y su activación catalítica, DDX46 influye en la maduración de los transcritos, los programas de empalme alternativo y la composición del proteoma resultante. La alteración de la actividad helicasa del espliceosoma puede modificar redes de procesamiento de ARN que regulan la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y las salidas transcripcionales adaptativas al estrés. La desregulación de la maquinaria de empalme, incluidos los factores asociados a U5, se ha implicado de forma amplia en la reprogramación oncogénica del transcriptoma y en mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, lo que convierte a DDX46 en un nodo útil para estudios de biología del ARN.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DDX46 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DDX46 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DDX46 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DDX46 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DDX46.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DDX46 para la investigación de la señalización de DDX46, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DDX46 críticos para la función de DDX46
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DDX46 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DDX46 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DDX46 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DDX46. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DDX46 (h) y el plásmido HDR DDX46 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DDX46 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DDX46 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.