Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX21 (bovine): sc-437356

Présentation

DDX21 code une hélicase à ARN de type DEAD-box localisée dans le nucléole, qui coordonne plusieurs étapes de la biogenèse des ribosomes, notamment la transcription et la maturation du pré-ARNr, et soutient la fonction nucléolaire dépendante de l’ARN polymérase I. Par son activité de remodelage des ARN, DDX21 contribue à intégrer la maturation des ARNr à des programmes plus larges de métabolisme des ARN, qui influencent la progression du cycle cellulaire, la protéostasie et les réponses au stress cellulaire. La perturbation de la fonction de DDX21 est associée à une altération de l’intégrité du nucléole et de la capacité de traduction, des processus fréquemment étudiés dans des contextes tels que la signalisation proliférative, la stabilité du génome et les phénotypes d’adaptation au stress. Dans les systèmes bovins, DDX21 est pertinent pour des investigations mécanistiques de la croissance et du développement, des interactions hôte–pathogène susceptibles d’affecter la production de ribosomes, ainsi que de la régulation de l’expression génique liée au nucléole.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX21 (bovine) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène dans les lignées cellulaires bovine. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du , ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDX21.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en pour l'étude de la signalisation de DDX21, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de essentiels à la fonction de DDX21
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDX21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine) et le DDX21 plasmide CRISPR/Cas9 KO (bovine2) ciblent des sites distincts au sein du locus . Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDX21 plasmide HDR (bovine) et le DDX21 (bovine2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.