DDX18 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406057

Panoramica

DDX18 codifica un’elicasi nucleolare dell’RNA della famiglia DEAD-box che accoppia il rimodellamento dell’RNA dipendente dall’ATP alla biogenesi dei ribosomi e al processamento dell’RNA. DDX18 partecipa alla maturazione del pre-rRNA, all’assemblaggio di particelle preribosomiali e al coordinamento delle risposte allo stress nucleolare che influenzano la progressione del ciclo cellulare e la capacità globale di sintesi proteica. La perturbazione della funzione di DDX18 può compromettere il processamento dell’rRNA e l’omeostasi della traduzione, collegando questo fattore ai programmi di controllo della proliferazione e di mantenimento del genoma. Un’espressione alterata o una maggiore dipendenza da DDX18 sono state osservate in studi trascrizionali e funzionali correlati al cancro, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nel metabolismo dell’RNA associato alla crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX18 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DDX18 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DDX18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DDX18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DDX18.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DDX18 per lo studio della segnalazione di DDX18, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni DDX18 critici per la funzione di DDX18
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DDX18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal DDX18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DDX18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DDX18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal DDX18 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DDX18 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DDX18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DDX18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.