Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419970
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- DDIT3/GADD153/CHOP Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im DDIT3/GADD153/CHOP-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DDIT3/GADD153/CHOP: sc-7351
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-419970 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Das murine Gen **Ddit3** kodiert **DDIT3** (auch bekannt als **GADD153/CHOP**), einen stressinduzierbaren bZIP-Transkriptionsfaktor, der mit Mitgliedern der C/EBP-Familie heterodimerisiert, um während zellulärem Stress die Genexpression umzuprogrammieren. Es ist ein zentraler Effektor der Unfolded-Protein-Response (UPR) stromabwärts der **PERK–eIF2α–ATF4**-Signalachse und verknüpft Stress des endoplasmatischen Retikulums mit oxidativem Stress, Nährstoffmangel und DNA-Schadens-Signalwegen. DDIT3 reguliert Apoptose, Autophagie und Zellzyklus-Kontrolle, beeinflusst die mitochondriale Integrität und steuert Transkriptionsprogramme, die über das Zellschicksal entscheiden. Eine veränderte DDIT3-Aktivität wird mit entzündlichen und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht und dient häufig als mechanistischer Readout in Modellen der Neurodegeneration, des diabetesassoziierten β‑Zell-Stresses und der Stressanpassung im Tumormikromilieu.
Das DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ddit3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ddit3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ddit3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DDIT3/GADD153/CHOP-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ddit3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DDIT3/GADD153/CHOP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Ddit3-Exone abzielen, die für die DDIT3/GADD153/CHOP-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ddit3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ddit3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DDIT3/GADD153/CHOP HDR-Plasmid (m) und DDIT3/GADD153/CHOP HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ddit3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ddit3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.