Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
DDIT3/CHOP/GADD153 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419970-ACT
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR Activation Plasmid (m) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR Aktivierungsplasmide (m) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) und vom DDIT3/GADD153/CHOP CRISPR-Aktivierungsplasmid (m2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der Ddit3-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DDIT3/GADD153/CHOP: sc-7351
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DDIT3/CHOP/GADD153 CRISPR Activation Plasmid (m) | sc-419970-ACT | 20 µg | $397.00 |
Ddit3 kodiert den stressinduzierbaren Transkriptionsfaktor DDIT3/CHOP/GADD153, einen zentralen Effektor der integrierten Stressantwort sowie der durch Stress des endoplasmatischen Retikulums (ER) ausgelösten Unfolded-Protein-Response (UPR). CHOP bildet Heterodimere mit Mitgliedern der C/EBP-Familie und gestaltet dadurch Genexpressionsprogramme um, die bei proteotoxischem und metabolischem Stress Apoptose, Autophagie, Redoxhomöostase und Zellzykluskontrolle beeinflussen. In Mauszellen wird Ddit3 häufig als molekularer Readout für ER-Stress nachgeschaltet an die PERK–eIF2α–ATF4-Signalachse verwendet und steht zudem in Wechselwirkung mit mitochondrialer Dysfunktion und inflammatorischen Signalwegen. Eine fehlregulierte Ddit3-Aktivität wurde in Modellen für Stoffwechselerkrankungen, Neurodegeneration, Gewebeschädigung und Tumorbiologie beschrieben, was seine Eignung für mechanistische Untersuchungen der Stressanpassung und von Zellschicksalsentscheidungen unterstreicht.
DDIT3/GADD153/CHOP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Ddit3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
DDIT3/GADD153/CHOP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Ddit3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Ddit3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen DDIT3/GADD153/CHOP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Ddit3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von DDIT3/GADD153/CHOP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des DDIT3/GADD153/CHOP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Ddit3-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.