DDI2 Double Nickase Plasmid (h): sc-408297-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DDI2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DDI2 Double-Nickase-Plasmid (h) und DDI2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DDI2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DDI2: sc-514004
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DDI2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408297-NIC | 20 µg | $410.00 |
DDI2 (DNA-damage-inducible 1 homolog 2) kodiert einen Aspartatprotease-ähnlichen Faktor, der die Proteostase und eine stressadaptive Transkription unterstützt – insbesondere, indem er nach Proteasomenhemmung die Erholung des Proteasoms ermöglicht. Dies geschieht durch die Prozessierung des am ER verankerten Transkriptionsfaktors NFE2L1/NRF1. Über diesen NRF1-abhängigen Signalweg trägt DDI2 dazu bei, die Expression von Proteasomenuntereinheiten und weiteren Qualitätskontrollgenen zu koordinieren, und verknüpft so den ubiquitinabhängigen Proteinabbau mit zellulären Antworten auf proteotoxischen Stress. Die Funktion von DDI2 überschneidet sich mit der ER-assoziierten Degradation und einer breiteren Signalgebung der Unfolded-Protein-Response und beeinflusst damit, wie sich Zellen an eine eingeschränkte Proteinabbaukapazität anpassen. Eine Fehlregulation dieser Achse ist relevant für die Stresstoleranz von Krebszellen und für proteostatische Defekte im Zusammenhang mit Neurodegeneration, was DDI2 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Proteasom-Homöostase macht.
DDI2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DDI2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DDI2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DDI2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DDI2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.