Plasmide Double Nickase (h) DDC: sc-403811-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) DDC correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide DDC Double Nickase (h) et le plasmide DDC Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DDC. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) DDC | sc-403811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) DDC | sc-403811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDC code pour la décarboxylase des acides aminés aromatiques (AADC), une enzyme dépendante du phosphate de pyridoxal qui catalyse la décarboxylation de la L‑DOPA en dopamine et du 5‑hydroxytryptophane en sérotonine. Par ces réactions, DDC occupe un point de branchement clé de la biosynthèse des neurotransmetteurs monoaminergiques et influence des réseaux de signalisation en aval qui régulent l’excitabilité neuronale, le contrôle moteur, les voies liées à l’humeur et la communication neuroendocrinienne. L’activité de DDC s’inscrit à l’interface du métabolisme de la tyrosine et du tryptophane, de l’homéostasie présynaptique des neurotransmetteurs et de la gestion vésiculaire des monoamines, reliant les flux métaboliques à la fonction synaptique. Une dérégulation de l’expression de DDC ou de son activité enzymatique est pertinente dans l’étude des perturbations des voies dopaminergiques et sérotoninergiques, des phénotypes neurodéveloppementaux et liés au mouvement, ainsi que des mécanismes plus larges de couplage entre métabolisme et neurotransmission.
DDC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DDC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DDC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DDC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DDC.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.