Partículas Lentivirales de Activación (h) DCST2: sc-405719-LAC

DCST2 (DC-STAMP domain containing 2) codifica una proteína de membrana multipaso implicada en procesos de fusión célula–célula y remodelación de membranas, con la evidencia funcional más sólida en biología reproductiva, donde miembros de la familia DCST contribuyen a la competencia para la fusión entre espermatozoide y óvulo. Como factor putativo de tipo tetraspanina, DCST2 se estudia en el contexto de la interacción entre gametos, el tráfico de membranas y la organización de receptores de superficie que coordinan eventos de señalización y fusión relacionados con la fecundación. La regulación alterada de proteínas de membrana asociadas a la fusión puede influir en fenotipos de fertilidad y podría cruzarse con vías que controlan la adhesión celular y la dinámica de membranas, relevantes para la biología del desarrollo.

Las partículas de activación lentiviral DCST2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de DCST2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral DCST2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción DCST2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de DCST2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo DCST2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.