DCC Double Nickase Plasmid (h): sc-401035-NIC

DCC (deleted in colorectal carcinoma) kodiert einen Netrin-1-Rezeptor aus der Immunglobulin-Superfamilie, der die Axonführung, neuronale Migration und das Remodeling des Zytoskeletts über Signalwege reguliert, zu denen unter anderem die Rho-Familie der GTPasen sowie die Dynamik fokaler Adhäsionen gehören. In Abwesenheit des Liganden kann DCC als Abhängigkeitsrezeptor fungieren, der Apoptose und Zellüberleben beeinflusst und damit die Wahrnehmung extrazellulärer Signale mit intrazellulären Signalentscheidungen verknüpft. Über die Neuroentwicklung hinaus trägt DCC in verschiedenen Geweben zu Zelladhäsion und gerichteter Migration bei, und eine veränderte DCC-Expression oder genomische Störungen wurden mit Tumorprogression, Invasionsphänotypen und neuroentwicklungsbezogenen Auffälligkeiten in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen DCC zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Untersuchungen der Signalübertragung durch Leitsignale, der Morphogenese und krankheitsrelevanter Veränderungen von Zellmotilität und Überlebensprogrammen.

DCC Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DCC-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DCC abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DCC-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DCC-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.