DC-SIGNR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404217-ACT

O CLEC4M humano codifica o DC-SIGNR, um recetor de lectina do tipo C enriquecido em células endoteliais que reconhece glicanos ricos em manose e fucosilados para mediar a ligação a carboidratos dependente de Ca2+. Por meio de funções de captura de ligandos e de adesão, o DC-SIGNR influencia interações célula–célula e o envolvimento com patógenos em interfaces mucosas e vasculares, com efeitos a jusante no tráfego endocítico e na sinalização imunitária inata. A atividade do CLEC4M cruza-se com processos de reconhecimento dependentes de glicanos que moldam o processamento de antigénios, as respostas inflamatórias e a ancoragem de leucócitos. A variabilidade genética e de expressão em CLEC4M tem sido examinada em contextos relacionados com a suscetibilidade a doenças infecciosas e fenótipos ligados ao sistema imunitário, sustentando a sua relevância como modulador de interações hospedeiro–patógeno e hospedeiro–microbiota.

DC-SIGNR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLEC4M sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DC-SIGNR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLEC4M em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLEC4M, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DC-SIGNR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLEC4M nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DC-SIGNR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DC-SIGNR em células tumorais com expressão de CLEC4M silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.