Plásmido CRISPR de Activación (h) DC-SIGNR: sc-404217-ACT

El gen humano **CLEC4M** codifica **DC-SIGNR**, un receptor de lectina tipo C enriquecido en células endoteliales que reconoce glicanos de alta manosa y fucosilados para mediar la unión a carbohidratos dependiente de Ca2+. A través de funciones de captura de ligandos y adhesión, DC-SIGNR influye en las interacciones célula–célula y en el contacto con patógenos en interfaces mucosas y vasculares, con efectos posteriores sobre el tráfico endocítico y la señalización inmunitaria innata. La actividad de CLEC4M se cruza con procesos de reconocimiento dependientes de glicanos que moldean el procesamiento de antígenos, las respuestas inflamatorias y el anclaje de leucocitos. La variabilidad genética y de expresión de CLEC4M se ha estudiado en contextos relacionados con la susceptibilidad a enfermedades infecciosas y fenotipos inmunitarios, lo que respalda su relevancia como modulador de las interacciones huésped–patógeno y huésped–microbiota.

DC-SIGNR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CLEC4M sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DC-SIGNR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CLEC4M en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CLEC4M, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DC-SIGNR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CLEC4M y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DC-SIGNR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DC-SIGNR en células tumorales con expresión de CLEC4M silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.