DBR1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407375
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- DBR1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico DBR1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:DBR1 Anticorpo (3A7): sc-517060
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
DBR1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407375 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
DBR1 codifica a enzima 1 de desramificação de laços (lariats) de RNA, uma fosfodiesterase conservada que hidrolisa a ligação fosfodiéster 2′–5′ nos pontos de ramificação de lariats de introns para linearizar introns excisados e permitir sua degradação. Essa atividade vincula o DBR1 ao processamento de RNA dependente do spliceossomo, às vias de degradação de introns e à manutenção da homeostase de RNA, que pode influenciar programas de expressão gênica. A perturbação da desramificação de lariats pode alterar o equilíbrio entre espécies de RNA circular e linear e remodelar a regulação pós-transcricional em contextos de estresse e diferenciação. Assim, a disfunção de DBR1 tem sido associada na literatura a fenótipos neurológicos e de suscetibilidade a vírus, reforçando sua relevância para estudos mecanísticos do metabolismo de RNA em tipos celulares relevantes para doenças.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO DBR1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DBR1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DBR1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DBR1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína DBR1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DBR1 para a investigação da sinalização de DBR1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DBR1 críticos para a função DBR1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DBR1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo DBR1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo DBR1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DBR1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo DBR1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR DBR1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DBR1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DBR1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.