DBH CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402441

Übersicht

Dopamin-β-Hydroxylase (DBH) kodiert eine kupferabhängige Monooxygenase, die in sekretorischen Vesikeln sympathischer Neuronen und adrenaler chromaffiner Zellen die Umwandlung von Dopamin zu Noradrenalin katalysiert. Durch die Steuerung der Katecholamin-Biosynthese beeinflusst DBH die adrenerge Signalübertragung, neuroendokrine Stressantworten sowie nachgeschaltete GPCR-vermittelte Signalwege, die den kardiovaskulären Tonus und die Erregung des zentralen Nervensystems regulieren. Variationen in der DBH-Expression oder der enzymatischen Aktivität wurden mit einer veränderten Noradrenalin-Homöostase in Verbindung gebracht und im Kontext neuropsychiatrischer Phänotypen und autonomer Dysfunktionen untersucht. DBH ist daher ein nützliches Ziel, um den Fluss durch Katecholamin-Stoffwechselwege, die Reiz‑Sekretions‑Kopplung und das Neurotransmitter-Gleichgewicht in humanen Zellmodellen zu analysieren.

Das DBH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DBH-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DBH-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DBH nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DBH-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DBH-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DBH-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DBH-Exone abzielen, die für die DBH-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DBH-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DBH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom DBH CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DBH-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DBH HDR-Plasmid (h) und DBH HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DBH-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DBH-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.