Plasmide Double Nickase (h) Daxx: sc-400686-NIC

DAXX code Daxx, une protéine nucléaire multifonctionnelle qui agit comme corégulateur transcriptionnel et facteur associé à la chromatine, surtout connue pour son partenariat avec ATRX afin de déposer la variante d’histone H3.3 dans l’hétérochromatine répétitive et les régions télomériques. Par ses interactions avec les corps nucléaires PML et divers facteurs de transcription, Daxx influence l’organisation de la chromatine, les réponses aux dommages de l’ADN et les voies de signalisation induites par le stress. Daxx a également été impliquée dans la régulation de l’apoptose et la modulation des programmes transcriptionnels de l’immunité innée et liés aux interférons. Une fonction ou une expression dérégulée de DAXX a été associée à des états épigénétiques altérés et à une instabilité génomique observés dans plusieurs contextes pathologiques, notamment le cancer et des phénotypes neurodéveloppementaux.

Daxx Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DAXX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DAXX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DAXX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DAXX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.