DAX-1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402180-NIC

NR0B1 codifica DAX-1 (NR0B1), un recettore nucleare orfano atipico che funziona principalmente come coregolatore trascrizionale piuttosto che come recettore classico legante il DNA. DAX-1 modula le reti geniche steroidogeniche interagendo con recettori nucleari e coregolatori per regolare vie che controllano lo sviluppo surrenalico e gonadico, la biosintesi degli ormoni steroidei e la segnalazione dell’asse ipotalamo–ipofisi–gonadi. Nelle cellule umane, NR0B1 influenza la specificazione di linea e l’omeostasi endocrina attraverso programmi di repressione/attivazione trascrizionale che coinvolgono circuiti regolatori associati a SF-1/NR5A1 e LRH-1/NR5A2. La disregolazione di NR0B1 è collegata a disturbi dello sviluppo sessuale e a fenotipi di insufficienza surrenalica, a supporto della sua utilità come bersaglio in studi meccanicistici dello sviluppo endocrino e della segnalazione dei recettori nucleari.

DAX-1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NR0B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NR0B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NR0B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NR0B1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.