DAX-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419053

Übersicht

Nr0b1 kodiert DAX-1 (NR0B1), einen atypischen orphan nukleären Rezeptor, der vor allem als transkriptioneller Koregulator in steroidogenen und reproduktiven Geweben wirkt. DAX-1 moduliert nukleäre Rezeptor-Signalnetzwerke, indem es Transkriptionsprogramme, die von Faktoren wie SF-1/NR5A1 gesteuert werden, reprimiert oder feinjustiert, und beeinflusst dadurch die Biosynthese von Steroidhormonen, die Entwicklung der Nebenniere sowie die Regulation der Hypothalamus-Hypophysen-Gonaden-Achse. In Mausmodellen wirkt sich eine veränderte DAX-1-Aktivität auf die gonadale Differenzierung, die Gametogenese und die endokrine Homöostase aus, wodurch Nr0b1 einen relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung entwicklungsbezogener Genregulation und der Kontrolle steroidogener Signalwege darstellt. Eine Fehlregulation von NR0B1-Orthologen wurde mit angeborenen adrenalen und reproduktiven Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Eignung für mechanistische Studien zur endokrinen Entwicklung und zu Signalwegen der Geschlechtsdetermination unterstützt.

Das DAX-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nr0b1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nr0b1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nr0b1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DAX-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nr0b1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DAX-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nr0b1-Exone abzielen, die für die DAX-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nr0b1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DAX-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DAX-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nr0b1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DAX-1 HDR-Plasmid (m) und DAX-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nr0b1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nr0b1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.