DARPP-32 Lentiviral Activation Particles (h2): sc-400430-LAC-2

Das humane PPP1R1B-Gen kodiert DARPP-32 (dopamin- und cAMP-reguliertes Phosphoprotein mit 32 kDa), einen zentralen Signal‑Integrator in mittelgroßen spiny Neuronen, der dopaminerge und glutamaterge Eingänge mit der Regulation der Proteinphosphatase 1 (PP1) verknüpft. Nach PKA‑abhängiger Phosphorylierung hemmt DARPP‑32 PP1 und moduliert dadurch nachgeschaltete Phosphorylierungsnetzwerke, die synaptische Plastizität, neuronale Erregbarkeit und Transkriptionsprogramme innerhalb der cAMP/PKA‑ und Dopaminrezeptor‑Signalwege steuern, während alternative Phosphorylierungszustände eine Kopplung an Calcineurin und andere Kinasen vermitteln. Veränderte PPP1R1B/DARPP‑32‑Signalgebung wurde mit neuropsychiatrischen und neurodegenerativen Phänotypen sowie mit entgleister onkogener Signalgebung in bestimmten Tumorkontexten in Verbindung gebracht, was seine breite Rolle in der phosphorylierungsabhängigen Kontrolle des zellulären Zustands widerspiegelt. Geneditierung von PPP1R1B ermöglicht mechanistische Untersuchungen der dopaminvermittelten Signaltransduktion, des Phosphatase/Kinase‑Gleichgewichts und der gezielten Analyse von Signalwegen in neuronalen Modellen und krankheitsrelevanten Zellsystemen.

DARPP-32 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PPP1R1B-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DARPP-32 Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PPP1R1B-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DARPP-32-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PPP1R1B-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.