DARPP-32 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-422380

Übersicht

Ppp1r1b kodiert DARPP-32 (dopamin- und cAMP-reguliertes Phosphoprotein, 32 kDa), einen zentralen Integrator dopaminerger und glutamaterger Signalübertragung in striatalen Medium-Spiny-Neuronen. Über einen phosphorylierungsabhängigen Schaltmechanismus moduliert DARPP-32 die Aktivität der Proteinphosphatase 1 (PP1) und verknüpft die cAMP/PKA-Signalkaskade mit der nachgeschalteten Regulation synaptischer Plastizität, der Funktion von Ionenkanälen und der Signalübertragung an Neurotransmitterrezeptoren. Dieser Knotenpunkt überschneidet sich mit Signalwegen, die Belohnungslernen, motorische Kontrolle und transkriptionelle Antworten auf Neuromodulatoren steuern, wodurch Ppp1r1b in Studien zur Basalganglien-Schaltkreisfunktion häufig als gemeinsamer Readout dient. Veränderte DARPP-32-Signalgebung wurde mit Mechanismen neuropsychiatrischer und neurodegenerativer Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter dysregulierte Dopamin-Signalübertragung, maladaptive Plastizität und stressassoziierte Verhaltensphänotypen in Mausmodellen.

Das DARPP-32 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ppp1r1b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ppp1r1b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ppp1r1b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DARPP-32-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ppp1r1b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DARPP-32-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ppp1r1b-Exone abzielen, die für die DARPP-32-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ppp1r1b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DARPP-32 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DARPP-32 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ppp1r1b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DARPP-32 HDR-Plasmid (m) und DARPP-32 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ppp1r1b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ppp1r1b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.