DAP-5 Double Nickase Plasmid (h): sc-405901-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DAP-5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DAP-5 Double-Nickase-Plasmid (h) und DAP-5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf EIF4G2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DAP-5: sc-137011
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DAP-5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405901-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DAP-5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405901-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EIF4G2 kodiert DAP-5 (auch bekannt als eIF4G2/NAT1), ein nichtkanonisches Gerüstprotein der Translationsinitiation, das cap-unabhängige und IRES-abhängige mRNA-Translation unterstützt, insbesondere unter Bedingungen, in denen die eIF4F-Aktivität eingeschränkt ist. DAP-5 trägt zur Kontrolle der Translation während zellulärer Stressantworten, Apoptose und Differenzierung bei, indem es Interaktionen mit Initiationsfaktoren koordiniert und die selektive Rekrutierung bestimmter mRNAs ermöglicht. Über diese Mechanismen beeinflusst EIF4G2 die Proteostase und Signalprogramme, die die Genexpression auf der Ebene der Translation umgestalten. Eine Fehlregulation der mit EIF4G2 verknüpften translationalen Reprogrammierung wurde in Zusammenhängen wie dem Überleben von Tumorzellen, neuroentwicklungsbezogenen Prozessen und stressadaptiven Phänotypen untersucht und macht das Gen zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien der RNA-Regulation.
DAP-5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des EIF4G2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von EIF4G2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die EIF4G2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit EIF4G2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.