DAP-5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420151

Übersicht

Das Mausgen **Eif4g2** kodiert **DAP-5** (auch bekannt als **eIF4G2**), ein nicht-kanonisches Gerüstprotein der Translationsinitiation, das die cap-unabhängige mRNA-Translation unterstützt – insbesondere unter Stressbedingungen, wenn die cap-abhängige Translation abgeschwächt ist. DAP-5 interagiert mit Komponenten der Initiationsmaschinerie und trägt zur IRES-vermittelten Translation ausgewählter Transkripte bei, wodurch es die Proteomzusammensetzung während Apoptose, ER-Stress und Nährstoffmangel mitprägt. Über seine Rolle in der Translationskontrolle beeinflusst DAP-5 Entscheidungen zum Zellüberleben, die Zellzyklusprogression und Differenzierungsprogramme. Eine Fehlregulation von EIF4G2/DAP-5-assoziierten Translationsnetzwerken wurde in Zusammenhängen beschrieben, die für onkogene Transformation, Neurobiologie und Stressanpassungs-Phänotypen relevant sind, was DAP-5 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien macht.

Das DAP-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Eif4g2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Eif4g2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Eif4g2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DAP-5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Eif4g2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DAP-5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Eif4g2-Exone abzielen, die für die DAP-5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Eif4g2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DAP-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DAP-5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Eif4g2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DAP-5 HDR-Plasmid (m) und DAP-5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Eif4g2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Eif4g2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.