DAGLβ Lentiviral Activation Particles (h): sc-406084-LAC

Die Diacylglycerol-Lipase beta (DAGLβ), codiert durch das menschliche DAGLB-Gen, ist eine Serin-Hydrolase, die Diacylglycerol in 2-Arachidonoylglycerol (2-AG) umwandelt, einen zentralen endocannabinoiden Lipidbotenstoff. Durch die Steuerung der 2-AG-Verfügbarkeit beeinflusst DAGLβ die Signalübertragung über Cannabinoidrezeptoren, die Dynamik lipidbasierter Second Messenger sowie nachgeschaltete Signalwege, die mit der Aktivierung von Immunzellen und der Produktion entzündlicher Mediatoren verknüpft sind. Die DAGLβ-Aktivität greift in Netzwerke der Arachidonsäure- und Eicosanoid-Signalgebung ein und positioniert das Enzym als Regulator der Wechselwirkung zwischen Lipidstoffwechsel und Entzündung. Eine Fehlregulation der Endocannabinoid- und Lipidsignalgebung unter Beteiligung von DAGLβ wurde in Zusammenhängen wie Neuroinflammation, metabolischer Dysfunktion und immunbezogenen Krankheitsmechanismen untersucht.

DAGLβ Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente DAGLB-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

DAGLβ Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der DAGLB-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen DAGLβ-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen DAGLB-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.