Particules Lentivirales d'Activation (h) DAGLβ: sc-406084-LAC

La lipase diacylglycérol bêta (DAGLβ), codée par le gène humain **DAGLB**, est une hydrolase à sérine qui convertit le diacylglycérol en **2‑arachidonoylglycérol (2‑AG)**, un principal messager lipidique endocannabinoïde. En contrôlant la disponibilité du 2‑AG, DAGLβ influence la signalisation des récepteurs cannabinoïdes, la dynamique des seconds messagers lipidiques et des voies en aval liées à l’activation des cellules immunitaires et à la production de médiateurs inflammatoires. L’activité de DAGLβ s’inscrit à l’interface des réseaux de l’acide arachidonique et des eicosanoïdes, ce qui en fait un régulateur du dialogue entre métabolisme lipidique et inflammation. Une dérégulation de la signalisation endocannabinoïde et lipidique impliquant DAGLβ a été étudiée dans des contextes tels que la neuroinflammation, les dysfonctionnements métaboliques et les mécanismes de maladies liées à l’immunité.

Les particules d'activation lentivirales DAGLβ (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de DAGLB dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales DAGLβ (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription DAGLB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de DAGLβ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif DAGLB ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.