Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
DAGLα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402826
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- DAGLα Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico DAGLα, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: DAGLα Antibody (E-6): sc-390409
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
DAGLα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402826 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
DAGLA codifica la diacilglicerolo lipasi alfa (DAGLα), un’idrolasi serinica associata alla membrana che catalizza l’idrolisi del diacilglicerolo per generare 2-arachidonoilglicerolo (2-AG), uno dei principali mediatori lipidici endocannabinoidi. Controllando la produzione di 2-AG, DAGLα influenza la segnalazione sinaptica retrograda, l’attivazione del recettore CB1 e la modulazione, dipendente dall’attività, del rilascio di neurotrasmettitori, collegando il metabolismo lipidico all’eccitabilità e alla plasticità neuronale. L’attività di DAGLα interagisce con la segnalazione fosfolipasi C–diacilglicerolo e con reti lipidiche più ampie correlate all’acido arachidonico, che modellano l’infiammazione e le risposte cellulari allo stress. Un’alterazione del tono endocannabinoide dipendente da DAGLA è stata associata a fenotipi neurosviluppativi e neuropsichiatrici ed è oggetto di studio in contesti quali epilessia, elaborazione del dolore e disregolazione metabolica.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO DAGLα (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DAGLA in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DAGLA insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DAGLA a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina DAGLα.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DAGLA per lo studio della segnalazione di DAGLα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DAGLA critici per la funzione di DAGLα
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DAGLA per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal DAGLα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal DAGLα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DAGLA. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal DAGLα Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR DAGLα (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DAGLA per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DAGLA definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.