D2DR/Dopamine D2 Receptor CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420053

Übersicht

Drd2 kodiert den Dopamin‑D2‑Rezeptor (D2DR), einen Gi/o‑gekoppelten GPCR, der die neuronale Erregbarkeit und die synaptische Transmission moduliert, indem er die Adenylylcyclase hemmt, die cAMP/PKA‑Signalübertragung reduziert und die Aktivität von Ionenkanälen reguliert. D2DR beeinflusst außerdem MAPK/ERK‑ und PI3K‑assoziierte Signalwege und wirkt als Autorezeptor, der die Dopaminfreisetzung und ‑synthese in dopaminergen Schaltkreisen kontrolliert. Im Mausgehirn trägt Drd2 zur striatalen und kortikolimbischen Signalübertragung bei, die Motivation, Belohnungslernen und motorische Kontrolle zugrunde liegt. Eine Fehlregulation der D2DR‑Signalgebung wurde mit der Biologie neuropsychiatrischer Erkrankungen und Bewegungsstörungen in Verbindung gebracht, wodurch Drd2 ein häufig genutztes Ziel für mechanistische Studien dopaminerger Schaltkreise und rezeptorvermittelter Signalübertragung ist.

Das D2DR/Dopamine D2 Receptor CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Drd2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Drd2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Drd2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die D2DR/Dopamine D2 Receptor-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Drd2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der D2DR/Dopamine D2 Receptor-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Drd2-Exone abzielen, die für die D2DR/Dopamine D2 Receptor-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Drd2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom D2DR/Dopamine D2 Receptor CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom D2DR/Dopamine D2 Receptor CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Drd2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das D2DR/Dopamine D2 Receptor HDR-Plasmid (m) und D2DR/Dopamine D2 Receptor HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Drd2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Drd2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.