Plasmide CRISPR d'Activation (h) D1DR/Dopamine Receptor D1: sc-400532-ACT

DRD1 code le récepteur dopaminergique D1 (D1DR), un récepteur couplé aux protéines G qui s’associe principalement à Gαs/olf pour stimuler l’adénylate cyclase, augmenter l’AMPc intracellulaire et activer des cascades de signalisation dépendantes de la PKA. Dans les neurones, la signalisation via D1DR module l’excitabilité membranaire, la plasticité synaptique et des programmes d’expression génique par l’intermédiaire d’effecteurs en aval, notamment CREB et DARPP-32, intégrant le tonus dopaminergique à la fonction des circuits. DRD1 participe à des voies médiées par la dopamine qui façonnent la récompense, la motivation et le contrôle moteur, et des modifications de l’expression du récepteur ou de la dynamique de signalisation sont fréquemment étudiées dans le contexte de la recherche sur les troubles neuropsychiatriques et les troubles du mouvement. En tant que récepteur membranaire à l’expression étroitement régulée, DRD1 constitue une cible utile pour étudier la désensibilisation des GPCR, le trafic des récepteurs et les interactions (crosstalk) avec d’autres systèmes neuromodulateurs.

D1DR/Dopamine Receptor D1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DRD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

D1DR/Dopamine Receptor D1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DRD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DRD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de D1DR/Dopamine Receptor D1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DRD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de D1DR/Dopamine Receptor D1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie D1DR/Dopamine Receptor D1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DRD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.