Cytokeratin 3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402161-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cytokeratin 3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cytokeratin 3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cytokeratin 3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KRT3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cytokeratin 3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT3 kodiert Zytokeratin 3, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ II, das mit Keratin 12 obligate Heteropolymere bildet und so das zytoskelettale Netzwerk der Hornhautepithelzellen aufbaut. Dieses Filamentsystem verleiht mechanische Widerstandsfähigkeit, erhält die Epithelarchitektur und trägt über eine koordinierte Regulation von Zytoskelett und Zellkontakten zu Prozessen wie Zelldifferenzierung, Migration und Wundheilung bei. Eine veränderte Expression oder strukturelle Störung hornhautangereicherter Keratine ist mit Phänotypen erhöhter epithelialer Fragilität und Pathologien der Hornhautoberfläche assoziiert, weshalb KRT3 ein nützlicher Marker und funktioneller Knotenpunkt zur Untersuchung der Homöostase des okulären Epithels ist. Darüber hinaus steht der Umbau des Keratinnetzwerks in Wechselwirkung mit Stressantwort- und zytoskelettassoziierten Signalwegen, die die Barriereintegrität und die Geweberegeneration beeinflussen.
Cytokeratin 3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KRT3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KRT3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KRT3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KRT3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.