Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (m): sc-421344-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cytokeratin 19 Double-Nickase-Plasmid (m) und Cytokeratin 19 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Krt19 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cytokeratin 19: sc-376126
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421344-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421344-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen **Krt19** kodiert das Zytokeratin 19 (K19), ein Typ‑I‑Intermediärfilament, das obligate Heteropolymere mit Typ‑II‑Keratinen bildet, um die epithelialen zytoskelettalen Architektur und mechanische Belastbarkeit zu stützen. K19 trägt zur Kontrolle der Zellform, zur Dynamik von Zelladhäsionen und zu epithelialen Differenzierungsprogrammen bei; zudem steht sein Filamentnetzwerk mit Signal-Knotenpunkten in Verbindung, die Stressantworten, Polarität und den Umbau des Zytoskeletts regulieren. Als in einfachen Epithelien und bestimmten progenitorähnlichen epithelialen Zuständen angereicherter Marker wird K19 häufig verwendet, um epitheliale Subtypen zu stratifizieren und Übergänge wie Gewebeumbau und Linienfestlegung zu verfolgen. Eine dysregulierte K19-Expression und Filamentorganisation ist mit veränderter epithelialer Integrität assoziiert und wird in Mausmodellen in Zusammenhang mit Gewebeschädigung, Entzündung und onkogener Transformation breit untersucht.
Cytokeratin 19 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Krt19-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Krt19 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Krt19-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Krt19-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.