Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (h): sc-400281-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Cytokeratin 19 Double-Nickase-Plasmid (h) und Cytokeratin 19 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KRT19 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cytokeratin 19: sc-376126
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400281-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Cytokeratin 19 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400281-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT19 kodiert Zytokeratin 19, ein Intermediärfilamentprotein vom Typ I, das zur Organisation des epithelialen Zytoskeletts, zur mechanischen Stabilität der Zelle und zur Aufrechterhaltung der Polarität beiträgt. Zytokeratin 19 ist an der Assemblierung und dem Umbau von Keratinfilamenten beteiligt, die mit Zelladhäsion und Zell-Zell-Kontaktkomplexen koordiniert sind, und beeinflusst dadurch die epitheliale Differenzierung sowie Stressantworten. Eine veränderte KRT19-Expression wird häufig als molekularer Indikator der epithelialen Abstammungslinie und von Zustandsänderungen von Zellen verwendet, wie sie bei Dysplasie, invasionsassoziiertem phänotypischem Umschalten und metastatischer Dissemination beobachtet werden. In der Forschung zu menschlichen Erkrankungen wird KRT19 häufig im Kontext von Tumorheterogenität, der Regulation epithelialer Marker und von Signalprogrammen untersucht, die mit Migration und Überleben verknüpft sind.
Cytokeratin 19 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KRT19-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KRT19 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KRT19-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KRT19-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.